Berbagai usaha dan penelitian telah dilakukan untuk meningkatkan produksi dan mempercepat pertumbuhan ikan betok dalam pembudidayaannya. Salah satunya yaitu melalui penambahan prebiotik Mannanoligosakarida (MOS). Tujuan dari penelitian ini adalah untuk mengetahui pengaruh penambahan prebiotik MOS pada pakan terhadap pertumbuhan ikan betok di akuarium menggunakan air gambut. Penelitian ini dilakukan selama 60 hari menggunakan ikan betok (Anabas testudineus Bloch) dengan ukuran 3-5 cm. Penelitian terdiri dari dua perlakuan yaitu kontrol (K) dan perlakuan dengan penambahan prebiotik MOS 0,2% dari berat pakan yang diberikan dan setiap perlakuan terdiri dari tiga ulangan. Hasil penelitian menunjukkan penambahan prebiotik MOS pada pakan dengan media air gambut tidak terdapat perbedaan nyata terhadap kelangsungan hidup, pertumbuhan bobot harian dan pertumbuhan panjang harian kualitas air suhu, oksigen terlarut dan amonia tetapi berpengaruh nyata terhadap pertumbuhan bobot benih ikan betok dan kualitas air pH. Kata kunci : Ikan Betok, Prebiotik, Mannanoligosakarida (MOS), Pertumbuhan.