Kalimantan Selatan kaya akan tumbuhan berkhasiat obat, salah satunya Argyreia nervosa. Ekstrak etanol daun A. nervosa berpotensi sebagai antioksidan dengan nilai IC50 9,46 ppm. Penelitian ini bertujuan untuk mengisolasi senyawa antioksidan fraksi etil asetat daun A. nervosa. Metode ekstraksi yang digunakan maserasi. Pemisahan dan pemurnian isolat dilakukan dengan KLT, KCV, dan KK. Uji kualitatif dan uji kuantitatif aktivitas antioksidan menggunakan metode difenil pikrilhidrazil (DPPH). Identifikasi senyawa dengan spektrofotometer UV-Vis dan FTIR. Serbuk daun A. nervosa diekstraksi dengan etanol 96% dan diperoleh rendemen sebesar 16,916%. Rendemen fraksi etil asetat diperoleh sebesar 16,33%. Fraksi etil asetat difraksinasi kembali menggunakan KCV dengan eluen n-heksan:etil asetat (20:1, 15:1; 10:1, 9:1, 8:2, 7:3, 6:4, 5:5, 4:6, 3:7) v/v, dan metanol:etil asetat (1:4) v/v diperoleh 5 fraksi. Fraksi 4 digunakan pada KK dengan eluen n-heksan:etil asetat (20:1; 15:1; 10:1; 9:1; 7:3; dan 5:5) v/v. Uji kualitatif KLT menunjukkan isolat mengandung senyawa antioksidan dengan pereaksi DPPH. Analisis dengan spektrofotometer UV-Vis menghasilkan λmaks 344 nm dan 299 nm. Analisis FTIR menunjukkan terdapat gugus fungsi –OH, C=O, C-O, C=C (alkena dan aromatis), dan C-H. Kata Kunci : Antioksidan, DPPH, fraksi etil asetat, daun A. nervosa, isolasi